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应用案例分享——昆虫细胞表达杆状病毒澄清过滤 Cobetter®深层过滤应用
  • 科百特cobetter
  • 2023-08-23
  • 393


昆虫细胞表达杆状病毒是最大的环状单一双链DNA病毒,其基因组在90~230kb之间,具有编码上百种蛋白质的能力。该病毒基因组可在昆虫细胞核内进行复制和转录,其巨大的DNA复制后组装在杆状的核衣壳内。由于昆虫杆状病毒DNA具有大量的非复制必需区,能容许基因缺失或替换,能容纳大片段外源DNA的插入和表达,且表达的蛋白具有翻译后修饰作用。昆虫杆状病毒一般通过SF9昆虫细胞培养,并经过转染复制、病毒扩增后,随着细胞的裂解,收集细胞及上清,用于重组蛋白表达检测。经过转染、复制扩增后的杆状病毒收获液需要进行澄清过滤去除细胞碎片进入到下游纯化工艺步骤中。


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· 实验条件

针对初始细胞密度为4.2×106cells/ml,活率78.5%的昆虫细胞表达重组杆状病毒收获液,分别采用型号为CL40PC的深层过滤产品(23cm²,1.0-5.0μm)、CHV50(80cm²,5μm)进行澄清过滤。

控制进液流速100-150LMH进行恒流过滤。终点操作压力控制在1.0bar以内,滤出液混合浊康控制在50NTU以内。

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· 实验数据


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· 实验结论

CL40PC深层滤膜以及CHV50滤器针对昆虫杆状病毒有较好的载量和高病毒回收率的表现。

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